Нов комплект за откриване на нуклеинова киселина на коронавирус (SARS-Cov-2).
New Cороnavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluрудаscent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Нов комплект за откриване на нуклеинова киселина на коронавирус (SARS-Cov-2) (метод на флуоресцентна RT-PCR сонда)
【Packaging specакоcations 】25 теста/комплект
【Intended usвъзраст】
Този комплект се използва за качествено откриване на нуклеинова киселина от нов коронавирус в назофарингеални тампони, орофарингеални (гърлени) тампони, тампони от преден нос, тампони от средна носна раковина, назални промивки и назални аспирати от лица, за които техният доставчик на здравни услуги има съмнение за COVID19. Откриването на ORF1ab и N гени на новия коронавирус може да се използва за спомагателна диагностика и епидемиологичен мониторинг на нова коронавирусна инфекция.
【Principles of the procedure 】
Този комплект е предназначен за специфични сонди TaqMan и специфични праймери, предназначени за новия коронавирус (SARS-Cov-2) ORF1ab и N генни последователности. PCR реакционният разтвор съдържа 3 комплекта специфични праймери и флуоресцентни сонди за специфично откриване на мишени, а допълнителен набор от специфични праймери и флуоресцентни сонди се използва като вътрешна стандартна контрола на комплекта за откриване на ендогенни домакински гени.
Принципът на теста е, че специфичната флуоресцентна проба се усвоява и разгражда от екзонуклеазната активност на ензима Taq в PCR реакцията, така че репортерната флуоресцентна група и потушената флуоресцентна група да бъдат разделени, така че системата за наблюдение на флуоресценцията да може да получи флуоресцентна сигнал и след това Чрез ефекта на обогатяване на PCR амплификацията, флуоресцентният сигнал на сондата достига зададена прагова стойност-Ct стойност (праг на цикъл). В случай на липса на целеви ампликон, репортерната група на сондата е близо до групата за охлаждане. По това време настъпва флуоресцентен резонансен трансфер на енергия и флуоресценцията на репортерната група се потушава от потушаващата група, така че флуоресцентният сигнал не може да бъде открит от флуоресцентния PCR инструмент.
За да се наблюдава използването на реагенти по време на теста, комплектът е оборудван с положителни и отрицателни контроли: положителната контрола съдържа рекомбинантен плазмид на целевото място, а отрицателната контрола е дестилирана вода, която се използва за наблюдение на замърсяването на околната среда. Препоръчва се при тестването да се зададат едновременно положителна и отрицателна контрола.
【Main comпоненts 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Componентите | |
| имеe | спецификация | Количествоност | Количествоност | |
| Положителна контрола | 180 μL/флакон | 1 | 1 | Изкуствено конструирани плазмиди, Дестилирана вода |
| Отрицателна контрола | 180 μL/флакон | 1 | 1 | Дестилирана вода |
| Смес от SARS-Cov-2 | 358,5 μL/флакон | 1 | / | Специфични двойки праймери, специфични флуоресцентни сонди за откриване, dNTP, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, дестилирана вода и др. |
| Ензимен микс | 16,5 μL/флакон | 1 | / | Taq ензими, обратна транскриптаза, UNG ензими и др. |
| SARS-Cov-2 микс (лиофилизиран) | 25 теста/флакон | / | 1 | Специфични двойки праймери, специфични флуоресцентни сонди за откриване, dNTPs, Taq ензими, обратна транскриптаза, дестилирана вода и др. |
| 2x буфер | 375 μL/флакон | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, дестилирана вода и др. |
Забележка:(1) Компонентите в различни партидни комплекти не могат да се смесват или разменят.
(2) Пригответе свой собствен реагент: Комплект за екстракция на нуклеинова киселина.
【Storage condитиons и expiration date 】
For BST-SARS-25:Транспортирайте и съхранявайте при -20±5℃ за дълго време.
For BST-SARS-DR-25:Транспортиране при стайна температура. Съхранявайте при -20±5℃ за дълго време.
Избягвайте повтарящи се цикли на замразяване-размразяване. Срокът на валидност е ориентировъчно определен за 12 месеца.
Вижте етикета за датата на производство и употреба.
След първото отваряне реагентът може да се съхранява при -20±5 °C за не повече от 1 месец или до края на периода на реагента, която дата настъпи първа, за да се избегнат повтарящи се цикли на замразяване-размразяване и броя на замразяванията на реагента -циклите на размразяване не трябва да надвишават 6 пъти.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Приложим тип проба: Екстрахиран разтвор на нуклеинова киселина.
2. Съхранение и транспортиране на проби: Съхранявайте при -20±5 ℃ за 6 месеца. Замразявайте и размразявайте пробите не повече от 6 пъти.
【Tпрогнозаing metход】
1.Nucleic acid extraction
Изберете подходящ комплект за извличане на нуклеинова киселина за извличане на вирусна нуклеинова киселина и следвайте съответните инструкции за комплекта. Препоръчително е да използвате комплект за извличане и пречистване на нуклеинова киселина, произведен от Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. или еквивалентен комплект за пречистване на нуклеинова киселина.
2. Reaction reagent prepараtion
2.1 For BST-SARS-25:
( 1) Отстранете сместа SARS-Cov-2 и ензимната смес, разтопете напълно при стайна температура, разбъркайте старателно с устройство Vortex и след това центрофугирайте за кратко.
(2) 16,5 uL ензимен микс се добавя към 358,5 uL SARS-Cov-2 микс и се разбърква старателно, за да се получи смесеният реакционен разтвор.
(3) Пригответе чиста 0,2 ml PCR осмична епруветка и я маркирайте с 15 uL от горния смесен реакционен разтвор на ямка.
(4) Добавете 15 μL пречистен разтвор на нуклеинова киселина, положителната контрола и отрицателната контрола и внимателно покрийте капачката на осмичната епруветка.
(5) Разбъркайте добре, като обърнете с главата надолу и бързо центрофугирайте, за да концентрирате течността на дъното на епруветката.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Добавете 375 ul 2x буфер към SARS-Cov-2 Mix((лиофилизиран), за да приготвите реакционната смес. Разбъркайте старателно чрез пипетиране и след това центрофугирайте за кратко. (След като се приготви реакционната смес, се препоръчва да се съхранява при -20℃ при дългосрочно съхранение.)
(2) Пригответе чиста 0,2 ml PCR осмична епруветка и я маркирайте с 15 μL реакционна смес на ямка.
(3) Добавете 15 μL пречистен разтвор на нуклеинова киселина, положителната контрола и отрицателната контрола и внимателно покрийте капачката на осмичната епруветка.
(4) Разбъркайте добре, като обърнете с главата надолу и бързо центрофугирайте, за да концентрирате течността на дъното на епруветката.
3. PCR ampлифиcation （Моля, вижте ръководството на инструмента за работните настройки.）
3. 1 Поставете епруветката PCR 8 в камерата за проби на флуоресцентния PCR инструмент и поставете пробата за тестване, положителната контрола и отрицателната контрола според реда на зареждане.
3.2 Канал за откриване на флуоресценция:
( 1) Генът ORF1ab избира канала за откриване на FAM (Репортер: FAM, гасител: Няма).
(2) N ген избира канала за откриване на VIC (Репортер: VIC, гасител: Няма).
(3) Вътрешен стандартен ген избира канала за откриване на CY5 (Репортер: CY5, гасител: Няма).
(4) Пасивният еталон е зададен на ROX.
3.3 Настройка на параметрите на PCR програмата:
| стъпка | Температура (℃) | време | Брой цикли | |
| 1 | Реакция на обратна транскрипция | 50 | 15 мин | 1 |
| 2 | Активиране на ензима Taq | 95 | 2,5 мин | 1 |
| 3 | Активиране на ензима Taq | 93 | 10 s | 43 |
| Удължаване при отгряване и придобиване на флуоресценция | 55 | 30 с | ||
След настройка запазете файла и стартирайте програмата за реакция.
4.Results analysis
След като програмата приключи, резултатите се запазват автоматично и кривата на усилване се анализира. Кривата на усилване е настроена на прага по подразбиране на инструмента.
【Explanation of test results 】
1. Определете валидността на експеримента: Каналът FAM, VIC на положителната контрола трябва да има типична крива на усилване и стойността на Ct обикновено е по-малка от 34, но може да варира поради различни настройки на прага на различни инструменти. Отрицателната контрола FAM, VIC каналът трябва да бъде неусилен Ct. Прието е, че горните изисквания трябва да бъдат изпълнени едновременно, в противен случай този тест е невалиден.
2. Резултатна преценка
| FAM/VIC канал | Резултат от присъдата |
| Ct＜37 | Тестът на пробата е положителен |
| 37≤Ct<40 | Кривата на усилване е S-образна и подозрителните проби трябва да се изследват отново; ако резултатите от повторното изследване са постоянни, се оценява като положително, в противен случай е отрицателно |
| Ct≥40 или без усилване | Тестът на пробата е отрицателен (или под долната граница на откриване на комплекта) |
Забележка: ( 1) Ако каналът FAM и каналът VIC са положителни едновременно, SARS-Cov-2 се определя като положителен.
(2) Ако каналът FAM или каналът VIC е положителен, а другият канал е отрицателен, тестът трябва да се повтори. Ако е положителен в същото време, ще бъде оценен като SARS-Cov-2 положителен, в противен случай ще бъде оценен като SARS-Cov-2 отрицателен.
Свързани продукти
-
Комплект за откриване на антитела IgM/IgG на COVID-19
Комплект за откриване на IgM/IgG антитела срещу COVID-19 (Метод за имунохроматография с колоидно злато) Ръководство за продукта 【ИМЕ НА ПРОДУКТА】Комплект за откриване на антитела на COVID-19 IgM/IgG (Метод за имунохроматография с колоидно злато) 【СПЕЦИФИКАЦИИ НА ОПАКОВКАТА】 1 тест/комплект, 10 теста/комплект 【 РЕЗЮМЕ】 Новите коронавируси принадлежат към род β. COVID-19 е остро респираторно инфекциозно заболяване. Хората обикновено са податливи. В момента пациентите, заразени с новия коронавирус, са основният източник...
-
Комплект за извличане или пречистване на нуклеинова киселина
Комплект за извличане или пречистване на нуклеинова киселина или съхраняван при -20 ℃. Пробата трябва да се транспортира с къдрене при 0 ℃. Въведение Комплектът за екстракция или пречистване на нуклеинова киселина (метод с магнитни перли) е предназначен за автоматизирано пречистване на РНК и ДНК от телесни течности (като тампони, плазма, серум) с помощта на автоматизирани инструменти за екстракция на нуклеинова киселина. Технологията с магнитни частици осигурява висококачествена ДНК/РНК, която е подходяща за ...
-
SARS-CoV-2 комплект за анализ на антиген (имунохроматогр...
Комплект за изследване на антиген SARS-CoV-2 （Метод на имунохроматография) Ръководство за продукта 【ИМЕ НА ПРОДУКТА】Комплект за изследване на антиген на SARS-CoV-2 （Метод на имунохроматография) 【СПЕЦИФИКАЦИИ НА ОПАКОВКАТА】 1 тест/комплект 【РЕЗЮМЕ】 Новите коронавируси принадлежат към род β. COVID-19 е остро респираторно инфекциозно заболяване. Хората обикновено са податливи. В момента пациентите, заразени с новия коронавирус, са основните...
-
Комплект за анализ на антиген SARS-CoV-2
Комплект за изследване на антиген SARS-CoV-2 （Метод на имунохроматография) Ръководство на продукта 【ИМЕ НА ПРОДУКТА】Комплект за изследване на антиген SARS-CoV-2 （Метод на имунохроматография) 【СПЕЦИФИКАЦИИ НА ОПАКОВКАТА】 1 тест/комплект, 25 теста/комплект, 100 теста/комплект 【РЕЗЮМЕ 】 The новите коронавируси принадлежат към род β. COVID-19 е остро респираторно инфекциозно заболяване. Хората обикновено са податливи. В момента пациентите, заразени с новия коронавирус, са основният източник на инфекция; асимптоматични заразени хора...